尿總氮是血液除去蛋白的其他含氮物質(zhì),主要是蛋白的代謝產(chǎn)物,包括尿素、尿酸、肌酐、肌酸、氨基酸和氨等,另外還有含量很少的所謂未鑒定氮,如谷光甘肽和核甘酸的氮等,它們的分子量小,很易從腎臟排出,尿排泄氮類又受飲食中蛋白質(zhì)量的影響,也與身體的蛋白質(zhì)分解和合成代謝平衡有關(guān)。

常見的檢測方法有:Kjeldahl(凱氏定氮)法、氣相色譜法(GC)、紫外可見光譜法、Nessler試劑法、電導(dǎo)法等,下面介紹凱氏定氮法對(duì)尿液中的總氮含量進(jìn)行測定。

一.人尿總氮檢測:

正常值:<857mmol/24h(<12g/24h)

混合飲食:714-1285.2mmol/24h(10-18g/24h)

低蛋白飲食:357mmol/24h(5g/24h)

高蛋白飲食:1570-1785mmol/24h(22-25g/24h)。

異常結(jié)果:(1)升高:腎功能衰竭、尿路梗阻、心力衰竭、消化道出血、嚴(yán)重脫水、白血病等。(2)降低:嚴(yán)重肝病等。

需要檢查的人群:有發(fā)熱、嘔吐、高寒、惡心、容易出血、泌尿功能障礙等癥狀的人。

二.家畜尿總氮檢測:

凱氮的分析結(jié)果可以檢查日糧中物質(zhì)代謝的情況。家畜尿中的氮的存在形式和數(shù)量與家畜日糧中蛋白質(zhì)的質(zhì)和量有密切關(guān)系。

 實(shí)驗(yàn)原理

天然有機(jī)物(如蛋白質(zhì)、核酸及氨基酸等)的含氮量用凱氏定氮法來測定。當(dāng)天然含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí),分解出氮、二氧化碳及水。氮轉(zhuǎn)變出的氨與硫酸化合生成硫酸銨。分解反應(yīng)進(jìn)行得很慢,可加入硫酸銅及硫酸鉀或硫酸鈉促進(jìn)之,其中硫酸銅為催化劑,硫酸鉀或硫酸鈉可提高消化液的沸點(diǎn)。氧化劑過氧化氫也能加速反應(yīng)。

消化完了后,在凱氏定氮儀中加入強(qiáng)堿堿化消化液,使硫酸銨分解,放出氨。用水蒸汽蒸餾法,將氨蒸入過量標(biāo)準(zhǔn)無機(jī)酸溶液中,然后用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行滴定,準(zhǔn)確測定氨量,從而折算出含氮量。以甘氨酸為例,該過程的化學(xué)反應(yīng)如下:

實(shí)驗(yàn)過程

1、樣品制備

移取樣品1mL,加入消化管。加入混合催化劑(0.3gK2SO4、0.02gCuSO4),加入硫酸2ml。

2、消解

將加完樣品和試劑的消化管放置于消解儀上,蓋好排廢罩,設(shè)定消解儀參數(shù)如表1所示:

表1消解參數(shù)設(shè)置

3、測試

消解完成后,待消化管冷卻至室溫后取下備用。檢查定氮儀各試劑是否充足,同時(shí)做儀器空白,待儀器空白穩(wěn)定后,可將消解好的樣品上機(jī)測試。定氮儀參數(shù)設(shè)置如表2所示

 儀器

VELP凱氏定氮系統(tǒng)分為兩部分:消化系統(tǒng)和蒸餾滴定系統(tǒng)。具有自動(dòng)化程度高、耗材利用率高、準(zhǔn)確度高,節(jié)能環(huán)保、結(jié)構(gòu)緊湊美觀等優(yōu)點(diǎn)。

1. **的蒸汽發(fā)生器:常壓型

2. **的鈦金屬冷凝:更高的溫度交換效率

3. 聚合材質(zhì)防濺裝置:耐酸和堿腐蝕

4. 多任務(wù)軟件和**連接:7英寸觸摸屏和網(wǎng)絡(luò)連接

5. 符合21CFR第11部分:UDK159和UDK169完全符合

6. 比色滴定(UDK159-169):VELP集成滴定儀**免維護(hù)(AOAC推薦方法)

7. 操作員的*大**:**防護(hù)門,樣本管放置位置,**把手位置均配備**傳感器